ABSTRACT
INTRODUÇÃO O câncer é uma das principais causas de morte no mundo, sendo responsável por cerca de 8 milhões de mortes por ano, segundo dados da OMS. As mortes por câncer são provocadas por tumores que se originam em órgãos como pulmão, fígado, estômago, intestino, mama e esôfago. As células-tronco mesenquimais (CTM) foram identificadas em vários órgãos e estudos da sua interação com células tumorais têm apresentado resultados indicando ação inibitória sobre alguns tipos de tumores. Para explorar essa questão foram analisados os efeitos sobre células tumorais de carcinoma hepatocelular humano (HepG-2) do meio condicionado (MC) obtido do cultivo de CTM isoladas de tecido adiposo (TA), líquido amniótico (LA) e geleia de Wharton (GW). MÉTODOS Os MCs foram coletados após 24 horas de incubação das CTM sub-confluentes com ?-MEM contendo 20% de soro fetal bovino (SFB). Os MCs foram centrifugados e passados através de filtros de 0,22 ?M e armazenadas a -20 °C. O MC da própria célula HepG-2 foi utilizado como controle. Os efeitos dos MCs sobre a proliferação de células HepG-2 foram testados por ensaio MTT, em várias concentrações após 24 h de incubação. O ciclo celular de células HepG-2 tratadas com MC a 25%, 50% ou 75% foi analisado por citometria de fluxo (coloração IP) utilizando o software Modfit LT. A expressão dos genes bcl-2, bcl-6, CCND1 foi analisada por RT-PCR. A proliferação celular foi avaliada pela expressão das proteínas survivina, Bcl-2, PCNA e Ki-67 e pela quantificação de mitocôndrias com corante MitoTracker, assim como pelo potencial de membrana mitocondrial por corante JC-1 Mitoscreen utilizando equipamento de high content analysis. RESULTADOS Os meios condicionados de células-tronco de tecido adiposo (MC-TA) não alteraram a proliferação de células tumorais HepG-2 e os meios condicionados de células-tronco de líquido amniótico (MC-LA) e de geleia de Wharton (MC-GW) provocam aumento da proliferação, confirmada pela contagem de células com núcleos...
INTRODUCTION Cancer is a leading cause of death worldwide, accounting for about 8 million deaths per year, according to WHO data. Cancer deaths are caused by tumors that originate in organs such as lung, liver, stomach, bowel, breast and esophagus. The mesenchymal stem cells (MSCs) have been identified in many organs and studies of their interaction with tumor cells have shown results indicating an inhibitory effect on some types of tumors. To explore this question the effects of the conditioned medium (CM) obtained from mesenchymal stem cell isolated from adipose tissue (AT), amniotic fluid (AF) and Wharton jelly (WJ) on tumor cells of human hepatocellular carcinoma (HepG-2) were analyzed. METHODS The MSC CM was collected after 24 hours incubation of sub confluent MSC with ?-MEM containing 20% fetal bovine serum (FBS). The MSC CM were centrifuged and passed through 0.22 ?M filter and stored at -20° C. The CM of HepG-2 cell itself was used as control. The effects of contrast media on proliferation of HepG-2 cells were tested by MTT assay at various concentrations after 24 h of incubation. The cell cycle HepG-2 cells treated with CM at 25%, 50% or 75% was analyzed by flow cytometry (PI staining) using Modfit software LT. The expression of the genes Bcl-2, Bcl-6, CCND1 was analyzed by RT-PCR. Cell proliferation was assessed by the expression of survivin, Bcl-2, Ki-67 and PCNA proteins, and the quantization of mitochondrial by MitoTracker dye, as well as the mitochondrial membrane potential by JC-1 Mitoscreen dye using high content analysis equipment. RESULTS The conditioned media of mesenchymal stem cells (MSC) from adipose tissue (AT-CM) did not alter the proliferation of tumor HepG-2 cells and conditioned media of MSC cells from amniotic fluid (AF-CM) and Wharton jelly (WJ-CM) caused increased proliferation, confirmed by counting cells with nuclei stained with Hoechst 33342. The cell cycle analysis showed that exposure of HepG-2 cells to AF-CM...
Subject(s)
Humans , Adipose Tissue , Amniotic Fluid , Carcinoma, Hepatocellular , Culture Media, Conditioned , Stem Cells , Wharton JellyABSTRACT
Annona mucosa é uma árvore frutífera da família Annonaceae, produtora de importantes metabólitos secundários de interesse medicinal, como lignanas, acetogeninas e alcaloides. A cultura in vitro de calos representa um importante recurso para a produção contínua de metabólitos, viabilizando a conservação da biodiversidade química e a obtenção controlada de material para estudos biológicos e fitoquímicos. O objetivo deste trabalho foi otimizar a produção de calos friáveis de A. mucosa, avaliando o efeito de diferentes meios nutritivos e fitorreguladores. Segmentos de folha e de hipocótilo de plântulas germinadas in vivo foram utilizados como explantes e inoculados nos meios de cultura MS, WPM e B5 suplementados com picloram (2 - 20µM) isolado ou combinado com as citocininas BAP, KIN ou TDZ (0,2 - 1µM). As culturas foram mantidas a 26±2ºC, no escuro, com subcultivos mensais. A produção de calos foi avaliada por aferição do peso dos calos, após 90 dias. Em todos os tratamentos na presença da auxina picloram, o cultivo de hipocótilos resultou em maior porcentagem de formação de calos, sobretudo no meio de cultura WPM. A associação com TDZ produziu massa calogênica friável altamente proliferativa e ausente de oxidação, alcançando valores superiores àqueles obtidos em trabalhos prévios com a espécie. Os resultados viabilizam o uso do material em suspensões celulares e posterior caracterização fitoquímica para a exploração da produção in vitro de metabólitos da espécie.
The Annona mucosa is a fruit tree of the Annonaceae family that produces a range of secondary metabolites of medicinal interest, such as lignans, acetogenins and alkaloids. The callus culture represents a renewable source of valuable medicinal compounds and controlled supply of material for biological and phytochemical studies. Therefore, this study was carried out to investigate the effects of three nutrient media, different concentrations of picloram and cytokinin types, in order to optimize the biomass yield and friability of calluses of A. mucosa. Leaf and hypocotyl segments from seedlings produced from in vivo seed germination were used as explants, which were inoculated in MS, WPM and B5 culture media supplemented with picloram (2-20µM) only or in addition to the cytokinins BAP, KIN or TDZ (0,2 - 1µM ). Cultures were maintained at 26±2ºC in the dark, with monthly subcultures. After 90 days, biomass production was evaluated. In all treatments, hypocotyl explants provided the highest percentage of callus formation, particularly in WPM. The association with TDZ produced highly proliferative friable callus, with no oxidation, reaching higher values than the previous works with this species. The results enable the use of the calluses produced in cell suspensions and the subsequent phytochemical characterization, in order to explore the in vitro production of metabolites of the species.
Subject(s)
Plants, Medicinal/classification , Annona/anatomy & histology , Plant Growth Regulators/antagonists & inhibitors , In Vitro Techniques/instrumentation , Culture Media/analysisABSTRACT
O Jacarandá da Bahia é uma espécie florestal nativa pertencente a família Leguminosaea Papilionoideae com ocorrência desde o sul da Bahia até o estado de São Paulo. O extrativismo e a pecuária contribuíram para a sua quase extinção e apesar disso, pouco tem sido feito para a multiplicação desta espécie. A micropropagação é uma alternativa para obtenção de grande quantidade de mudas sadias em curto espaço de tempo. Foram utilizados meristemas apicais e gemas axilares de plântulas de Jacarandá da Bahia, cultivadas em condições assépticas nos tratamentos compostos por meios de cultura (MS e WPM), concentrações de BAP (4, 9 e 18 µM) e com a ausência ou presença de agente antioxidante (PVP ou carvão ativado), totalizando 18 tratamentos, cada um com 10 repetições. As avaliações foram realizadas com 4 e 8 semanas de cultivo, considerando a porcentagem de explantes oxidados. Os meios de cultura de antioxidantes testados não diferiram estatisticamente entre si, porém tratamentos com BAP na concentração de 18 µM foram os que apresentaram maior oxidação.
Dalbergia nigra is a native forest species belonging the Papilionoideae-Leguminosaea family occurring from southern Bahia to the state of Sao Paulo. The extraction and livestock contributed to its near extinction and yet little has been done to the multiplication of this species. The micropropagation techniques are an alternative in order to achieve a large amount of seedlings in a short time and under conditions plant without diseases. Used apical and lateral meristems of Dalbergia nigra seedlings, grown in aseptic conditions in treatments consisting of different culture media (MS and WPM), BAP concentrations (4, 9 and 18 µM) and the absence or presence of antioxidant agent (PVP or activated charcoal), all crossed each other, totaling 18 treatments, each with 10 repetitions. Evaluations were performed at 4 and 8 weeks of cultivation, considering the percentage of browning explants. The culture media of antioxidants tested did not differ statistically, but BAP at a concentration of 18 µM were those with the highest oxidation.
Subject(s)
In Vitro Techniques , Meristem , Conservation of Natural Resources , Dalbergia , Extinction, Biological , AntioxidantsABSTRACT
Stringent quality control protocols must be used in order to guaranty that a particular medium is able to recover all sort of organism that may be present in clinical samples. Our aim was to evaluate an alternative protocol that would allow us to detect medium failure to yield quantitative growth of selected pathogens, and compare with the document M22-A2 from NCCLS. The detection limit of Haemophilus influenzae was significantly different depending on media source. We conclude that for some fastidious microorganisms, quantitative verification of the growth capacity of the culture medium is advised.
O uso de protocolos de controle de qualidade com padrões rígidos devem ser utilizados para garantir o isolamento dos microrganismos. Nosso objetivo foi o de avaliar um procedimento alternativo que nos permitisse detectar falhas de crescimento bacteriano em termos quantitativos, e comparação com o protocolo estabelecido pelo documento M22-A2 do NCCLS. Haemophilus influenzae apresentou diferença significativa de crescimento entre meio de cultivo de fontes distintas. Nos concluímos que, para alguns microrganismos fastidiosos, seja feita uma verificação quantitativa da capacidade de crescimento de cada meio de cultivo.
ABSTRACT
Stringent quality control protocols must be used in order to guaranty that a particular medium is able to recover all sort of organism that may be present in clinical samples. Our aim was to evaluate an alternative protocol that would allow us to detect medium failure to yield quantitative growth of selected pathogens, and compare with the document M22-A2 from NCCLS. The detection limit of Haemophilus influenzae was significantly different depending on media source. We conclude that for some fastidious microorganisms, quantitative verification of the growth capacity of the culture medium is advised.
O uso de protocolos de controle de qualidade com padrões rígidos devem ser utilizados para garantir o isolamento dos microrganismos. Nosso objetivo foi o de avaliar um procedimento alternativo que nos permitisse detectar falhas de crescimento bacteriano em termos quantitativos, e comparação com o protocolo estabelecido pelo documento M22-A2 do NCCLS. Haemophilus influenzae apresentou diferença significativa de crescimento entre meio de cultivo de fontes distintas. Nos concluímos que, para alguns microrganismos fastidiosos, seja feita uma verificação quantitativa da capacidade de crescimento de cada meio de cultivo.